Obtención de anticuerpos policlonales conjugados con ficoeritrina y su empleo en el inmunodiagnóstico

Abstract

El desarrollo de anticuerpos policlonales conjugados, como reactivos secundarios que reconocen la IgG de ratón y la IgG humana en diversos sistemas de detección para el diagnóstico de enfermedades que comprometen el sistema inmune, constituye en la actualidad una de las prioridades del Sistema de Salud cubano. Partiendo de estas bases, en el presente trabajo se conjugaron con ficoeritrina los anticuerpos policlonales anti IgG humana en carnero, y anti IgG humana en pollo, además de IgG de ratón. Los anticuerpos y el pigmento empleados en la investigación fueron obtenidos en LABEX después de procesos de purificación, por inmunoafinidad, para el primero, y por intercambio iónico para el segundo; la pureza de ambos, fue determinada por electroforesis en geles de poliacrilamida (SDS-PAGE), y espectrofotometría UV-Visible. La conjugación se realizó por el método de Hardy, y para la evaluación de la actividad biológica, se utilizaron las técnicas de Citometría de Flujo (CF), y anticuerpos antinucleares (ANA) por inmunofluorescencia indirecta (IFI). Los resultados ponen de manifiesto que el grado de pureza de ambas biomoléculas fue óptimo para su uso en métodos de conjugación. El conjugado IgG de ratón-PE mostró su potencialidad como control negativo por CF, al no presentar marcaje específico, y aquellos contra IgG humana aplicados en la técnica ANA por IFI, demostraron un buen desempeño, al obtenerse patrones de reconocimiento de anticuerpos antinucleares en diluciones de hasta 1:80, comparables a los de referencia. Todos estos hallazgos permiten concluir que este trabajo abre paso a la fase de desarrollo de estos productos para su generalización en el Sistema de Salud.