Obtención del conjugado roboflavina – seroalbúmina bovina (GV – BSA) y su evaluación como inmunógeno

Abstract

En este trabajo se obtuvo el conjugado riboflavina - seroalbúmina bovina (GV-BSA) a partir de la reacción de condensación del producto principal de la oxidación de la riboflavina (GV) con seroalbúmina bovina (BSA) y posterior reducción con borohidruro de sodio. Este conjugado se semipurificó por los métodos de precipitación por salado y diálisis y se identificó por espectroscopia UV - Visible y electroforesis sobre acetato de celulosa y en gel de poliacrilamida (SDS – PAGE). La aparición de dos bandas en cada uno de los electroforegramas sugirieron la formación de un compuesto de masa molecular más elevado que la proteína, lo que indica la presencia de un enlace covalente entre la proteína y la riboflavina (GV). Se evaluó la actividad inmunogénica del conjugado GV - BSA desarrollando un esquema de inmunización en conejos F1, semigigantes blancos, las inoculaciones se realizaron por vía subcutánea aplicando una dosis inicial de 150 μg del conjugado GV – BSA. Para la detección de los anticuerpos se utilizó la técnica de inmunodifusión radial doble de Ouchterlony. La banda de precipitación antígeno – anticuerpo se hizo visible en el rango de concentraciones de riboflavina entre 0,6 y 0,9 mg/mL. Los resultados alcanzados demostraron la obtención de anticuerpos específicos contra la riboflavina.

A riboflavin - bovine serum albumin (GV – BSA) conjugate was prepared by the condensation reaction of the oxidation product of riboflavin (GV) with bovine serum albumin (BSA) and reduction with sodium borohydride. This conjugate was semipurified by salting out and dialysis. Using ultraviolet spectrum, sodium dodecyl sulfate – polyacrilamide gel electrophoresis (SDS – PAGE) and cellulose acetate electrophoresis the conjugate GV – BSA was identified. The appearance of two bands in both electrophoregrams suggests the formation of higher molecular weight material, indicating the covalent linkage between protein and the riboflavin (GV). GV – BSA conjugate immunogenic activity was also evaluated. F1 white semigigantic rabbits were immunized with this conjugate. Inoculations were performed by subcutaneous route injecting an initial dose of 150 μg of GV – BSA conjugate. Antibodies were detected according to the Ouchterlony double radial immunodiffusion technique. Antigen – antibody precipitation band was observed at a riboflavin concentration of 0,6 – 0,9 mg/mL. Results showed the production of specific antibodies against riboflavin.