Conjugacion de marcadores linfocitarios monoclonales para citometría de flujo

Abstract

La necesaria evaluación y seguimiento de los pacientes con VIH/SIDA, utilizando la cuantificación de las subpoblaciones linfocitarias CD3 CD4 y CD8 por Citometría de Flujo, así como el alto costo de los reactivos conjugados con FITC utilizados en esta técnica, fueron las premisas para el presente trabajo. Se propuso como objetivo la conjugación de los Anticuerpos Monoclonales anti CD3, anti CD4 y anti CD8 con Isotiocianato de Fluoresceína (FITC) para Citometría de Flujo. Se desarrolló el proceso de obtención de estos reactivos con una relación FITC/ Proteína entre 3 y 8 y la actividad biológica requerida; se determinó su utilidad para el diagnóstico y monitoreo de las subpoblaciones linfoides T CD3+, CD4+, CD8+. Los conjugados una vez obtenidos fueron evaluados mediante Citometría de Flujo teniendo como resultado una óptima sensibilidad, especificidad y actividad biológica. Los resultados muestran que no existe variación significativa entre estos productos y los similares de las casas comerciales ofertados internacionalmente. Se concluye que es posible desarrollar la tecnología propuesta para la obtención de conjugados y su uso en Citometría de Flujo, obteniéndose resultados que demuestran un nivel de calidad comparable a los existentes en el mercado internacional, así como su aplicación en el Sistema Nacional de Salud.

The necessary evaluation of HIV/SIDA patient using the cuantification of CD3, CD4 and CD8 linfocitary populations in Flow Cytometry, and the high cost of conjugatesreagents with Fluorescein Isothiocianate (FITC) used in this methods were themotivation of the present (paper) research. We proposed as objective the conjugation ofMonoclonal antibodies anti CD3, anti CD4 and anti CD8 with FITC to use in FlowCytometry. We developed the obtention process of this reagents with a relation FITC / protein between 3 - 8 and required biological activity. We determinated the utility for diagnostic and monitoring of CD3+, CD4+ and CD8+ T cell linfoids population. The conjugated antibodies were evaluated using Flow Cytometry and was obtained the optimal sensibility, specificity and biological activity. The results show that do not exist significative variation between this products and comercial similars used in the world. We conclude that, is possible to develop the described technology to obtain the conjugated and it use in Flow Cytometry. The results obtained show a level of similar quality to the international market also its application in the National System of Health.