Obtención de Reactivos Dobles Conjugados para el uso en Citometría de Flujo

Abstract

Los reactivos antiCD dobles conjugados con fluorocromos, brindan la posibilidad de identificar las variedades de leucocitos en sangre periférica humana, permitiendo su uso en diagnóstico para los pacientes con inmunodeficiencias, entre otros. En el país se utiliza este reactivo importado, limitando su disponibilidad para el Sistema de Salud Cubano; por lo que, en el LABEX, se investiga la obtención de reactivos para uso en Citometría de Flujo, teniendo una línea de productos de AcM antiCD como base diagnóstica. Para analizar los riesgos de la propuesta productiva del producto ior® LeukoCIM antiCD se aplicó la metodología de calidad HACCP, donde se identificaron 8 peligros potenciales y 24 puntos críticos, de los cuales 19 afectan la calidad del reactivo; descargándose su seguimiento a través de planes de medidas y vigilancia. En la propuesta de obtención de este reactivo para su mejora, se ensayaron simples conjugados del antiCD4 (PE, FITC) y dobles conjugados, en diferentes combinaciones (antiCD4-PE/antiCD45-FITC, antiCD4-PE/antiCD3-FITC, antiCD20-PE/antiCD3-FITC). En los simples conjugados antiCD4 se obtiene un 31.93 % de reconocimiento, apropiado como actividad biológica para el conjugado con PE y de 44.3 %, para el conjugado con FITC; correspondiendo a la dilución 1/20 y 1/5, respectivamente. Sin embargo, para las propuestas de reactivos dobles conjugados, cuando se utiliza el antiCD4-PE se recomienda trabajar con la dilución 1/10; pero existe afectación del reconocimiento, que no cumple para este AcM conjugado. Para el antiCD45-FITC se puede trabajar en cualquier dilución, sin afectación del marcaje. En las combinaciones antiCD3-FITC con antiCD4-PE y antiCD20-PE, se cumple con el porciento de reconocimiento, mayor a 73 % en ambas propuestas. También para el antiCD20–PE se refiere un 6.35 % como actividad biológica en rango, para su doble conjugado. Este estudio permitió establecer requisitos de mejoras para la obtención del reactivo doble conjugado en LABEX, en particular para el antiCD4-PE, abriendo paso a la fase desarrollo del producto para así alcanzar su posterior registro sanitario.