Propuesta de un proceso productivo para la obtención de un reactivo hemoclasificador anti-B

Abstract

El reactivo Hemoclasificador anti-B es de uso obligatorio para la clasificación de los grupos sanguíneos por el Sistema ABO; actividad frecuente en la red nacional de Hospitales y Bancos de Sangre. La elevación de los estándares regulatorios de los reactivos hemoclasificadores, conllevó a LABEX a adquirir un nuevo Hibridoma anti-B para desarrollar un diagnosticador que pueda ser comercializado. En el presente trabajo se caracterizó el crecimiento y producción del Hibridoma anti-B a escala de laboratorio en medio de cultivo RPMI suplementado con Suero Fetal Bovino y medio PFHM, empleando frascos rotatorios y modo de operación por lote, donde se calcularon y compararon parámetros como: velocidad de crecimiento, concentración celular, tiempo de duplicación y potencia de aglutinación del sobrenadante de cultivo; obteniéndose los mejores resultados con medio RPMI. La adición de insulina y glutamina al medio PFHM, no mejoró la productividad de la línea celular. Se caracterizó el clon BMS-4 en procesos de fermentación in vivo (ratones BALB/c) e in vitro (frascos rotatorios y biorreactor de olas) y se elaboraron las propuestas de los procesos productivos para obtener un IFA con la calidad conforme a lo establecido regulatoriamente. En la evaluación económica de las variantes desarrolladas, la opción con frascos rotatorios y medio RPMI suplementado con suero fetal bovino resultó la más rentable, al representar un costo de producción de 290 422.99 UM/a y generar utilidades de 655 490.44 UM/a, con un tiempo de operación de 150 días al año que permitirá satisfacer la demanda nacional de 30 mil frascos anual.

The anti-B Hemoclassifier reagent is mandatory for the classification of blood groups by the ABO System; frequent activity in the national network of Hospitals and Blood Banks. The rise in regulatory standards for blood classification reagents led LABEX to acquire a new anti-B Hybridoma to develop a diagnostic that could be marketed. In the present work, the growth and production of anti-B Hybridoma was characterized on a laboratory scale in RPMI culture medium supplemented with Fetal Bovine Serum and PFHM medium, using rotary flasks and batch mode of operation, where parameters such as : growth rate, cell concentration, doubling time and agglutination power of the culture supernatant; obtaining the best results with RPMI medium. The addition of insulin and glutamine to the PFHM medium did not improve the productivity of the cell line. The BMS-4 clone was characterized in in vivo fermentation processes (BALB/c mice) and in vitro (rotary flasks and wave bioreactor) and the proposals for the production processes were elaborated to obtain an IFA with the quality as established. regulatory. In the economic evaluation of the variants developed, the option with rotary flasks and RPMI medium supplemented with bovine fetal serum was the most profitable, representing a production cost of 290,422.99 MU/y and generating profits of 655,490.44 MU/y, with a operating time of 150 days a year that will satisfy the national demand of 30 thousand bottles per year.