Obtención del anti-CD45 conjugado con Isotiocianato de Fluoresceína

Abstract

El reactivo anti-CD45 conjugado con Isotiocianato de Fluoresceina (FITC) es util para el diagnostico y estudio de inmunodeficiencias de celulas T y B. En la actualidad, Cuba no cuenta con este marcador leucocitario, limitando la disponibilidad de este reactivo para el Sistema de Salud cubano. En la propuesta de obtencion de este marcador fueron ensayados tres protocolos modificando la relacion descrita entre el fluorocromo a conjugar y el anticuerpo (protocolo 2, 1:4,6; protocolo 3, 1:7), basado en la proporcion de Harlow, E. and Lane, D, (protocolo 1, 1:2). El anticuerpo IgG 1 murina (anti-CD45) fue purificado por cromatografia de afinidad a una pureza de 99,3%. Se evaluo la densidad optica del conjugado a 495 nm y 280 nm y el porciento de reconocimiento leucocitario para citometria de flujo. Los tres protocolos ensayados muestran buena actividad biologica con un porciento de reconocimiento leucocitario en el rango de 90,7%-96,8%, destacando el 2 que permite la obtencion del anti-CD45 conjugado con FITC a un menor costo de produccion y beneficio en comparacion con el precio del producto importado SIGMA. Este estudio permitio establecer el proceso de conjugacion para el anti-CD45 con FITC en el Laboratorio de Anticuerpos y Biomodelos Experimentales (LABEX), abriendo paso a la fase desarrollo del producto para asi alcanzar su posterior registro sanitario.