Producción de sobrenadante anti-B en un medio de cultivo alternativo

Abstract

El descubrimiento del grupo sanguíneo ABO por el científico austríaco Karl Landsteiner, como también sus antígenos, marcaron un paso importante en el desarrollo de la medicina transfusional, lo que hizo más segura la transfusión de sangre en el mundo. Con el desarrollo de reactivos hemoclasificadores ABO mediante la aplicación de la tecnología hibridoma para la producción de anticuerpos monoclonales (AcM) también marco un punto importante en la eficacia de la medicina transfusional. El hemoclasicador ior® HemoCIM Anti-B es uno de los productos obtenidos en CIM-LABEX, éste junto a otros es uno de los más esenciales y demandados tanto nacional como internacional por Hospitales y Bancos de Sangre. El IFA sobrenadante anti-B obtenido del cultivo del hibridoma anti-B en el medio usualmente utilizado, no cumple con los estándares de calidad o liberación que establece el Sistema de Gestión de la Calidad de LABEX. El objetivo principal del siguiente trabajo investigativo es incrementar la productividad del hibridoma anti-B evaluando variantes de medios de cultivo de la plataforma del CIM. La evaluación de realizó a partir de una caracterización cinética del hibridoma en varios medios de cultivo de la plataforma de CIM-LABEX como RPMI 1640, DMEM/F-12 y PFHM-II, resultando el DMEM/F-12 suplementado con 8 % de SFB como el de mejor desempeño en cuanto concentración de las células vivas, viabilidad, potencia y avidez con valores superiores a los 2x106 cel/mL, 90% y 2048 respectivamente, llegando a valores inferiores de avidez por debajo de los 10 s. Se evaluaron otras alternativas de medios de cultivo como medios de cultivos suplementados y mezclas de medios, a partir del cumplimiento de los requisitos de calidad y liberación en cuanto a potencia, avidez e intensidad, utilizando el DMEM/F-12 y PFHM-II como medios de cultivo, Cell Boost 5 y Suero Fetal Bovino como suplementos, quedando como el de mejor desempeño el DMEM/F-12 suplementado con Cell Boost 5 (D+C) alcanzando una potencia de 1024, avidez de 5 s e intensidad de 1+ en ambos parámetros. Con la base de los resultados anteriores se propusieron tres alternativas de procesos de producción empleando los frascos rotatorios para la obtención de la IFA sobrenadante anti-B y se analizaron económicamente hasta la conformación del producto final, resultando como la mejor propuesta económicamente analizada el proceso de producción empleando el medio de cultivo DMEM/F-12 suplementado con 8% de SFB arrojando un costo total de producción de 61525.78 UM/a con una ganancia de 844654.22 UM/a, con un volumen de producción total de sobrenadante anti-B para formulación de 41.25 L diluido hasta 4 veces para cumplir la demanda anual de 30 000 frascos (165 L) en un tiempo de 45 días al año.